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色譜柱的平衡方法

瀏覽： 4665| 更新時(shí)間：2016-04-18 |
 　　色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是*條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。
　　色譜柱的平衡方法：
　?。?）首先用0.2ml/min的流速將色譜柱平衡過夜，然后將流速升高到1.0ml/min沖洗30分鐘，以便將色譜柱的填料充分平衡至*狀態(tài)，這樣可以保證色譜柱的使用壽命，并且保證在以后的使用中，獲得分析結(jié)果的重現(xiàn)性。
　　（2）平衡過程中，將流速緩慢地提高。
　?。?）用流動相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線(緩沖鹽或離子對試劑度如果較低，則需要較長的時(shí)間來平衡)。
　　流動相的配制： 液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點(diǎn)：
　?。?）流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時(shí)間保留在柱中)。
　?。?）流動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
　?。?）流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
　?。? ）流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。 如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
　　（5）流動相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。
　　（6）在流動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。