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液相色譜柱使用過程中該如何維護(hù)?

一、使用過程中的維護(hù)
 
1、流動(dòng)相的使用和分析方法的選擇
流動(dòng)相的純度、溶劑的選擇、適當(dāng)分析方法的使用與色譜柱的性能和壽命密切相關(guān)。
 
 1.1 流動(dòng)相的選擇
所選用的流動(dòng)相應(yīng)與色譜柱、待分析樣品相兼容,即樣品、樣品溶液和流動(dòng)相是互溶的。流動(dòng)相能夠溶解樣品,避免樣品沉淀析出;同時(shí)還要求流動(dòng)相與樣品不發(fā)生化學(xué)反應(yīng),并且要求與色譜柱不能發(fā)生溶解或化學(xué)反應(yīng)。
色譜分析應(yīng)選擇色譜級(jí)的流動(dòng)相。通常分析純的溶劑含有微量雜質(zhì),如有機(jī)溶劑中的聚乙二醇、無機(jī)鐵離子(Fe+)等,作為流動(dòng)相大量使用后會(huì)引起色譜柱性能變化。最好是使用色譜純級(jí)或者更高純度的試劑,盡量降低溶劑中雜質(zhì)帶來的損傷。
 
 1.2 流動(dòng)相過濾
使用色譜純?cè)噭┡渲屏鲃?dòng)相,使用前需經(jīng)0.45μm或者更小孔徑的濾膜過濾和超聲脫氣處理,減少灰塵、微生物等雜質(zhì)堵塞色譜柱,尤其是水溶性流動(dòng)相易引起微生物生長(zhǎng)而造成色譜柱阻塞。流動(dòng)相最好是現(xiàn)配現(xiàn)用,放置時(shí)間最好不要超過2天。
 
 1.3 流動(dòng)相的pH和緩沖鹽的選擇
極端pH的流動(dòng)相會(huì)破壞填料內(nèi)的共價(jià)鍵,“溶解”硅膠,使固定相流失,從而降低柱效,縮短使用壽命。以硅膠作基質(zhì)的固定相一般要求pH在2.5~7范圍內(nèi)使用。長(zhǎng)期在pH>7或pH<2使用環(huán)境中,硅膠會(huì)逐漸溶解或者表面鍵合的官能團(tuán)會(huì)逐漸流失。如果一定要用高或低pH的流動(dòng)相,最好是選用相適應(yīng)的色譜填料。
 
1.4 流速的控制
目前粒徑為1.8μm的UPLC的流速常設(shè)為0.3~0.5mL/min,粒徑為5μm的HPLC分析流速不大于1.5mL/min,粒徑為10μm半制備柱流速控制在3mL/min。流速過大,壓力升高,會(huì)引起色譜填料沖垮、塌陷。
 
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